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叔丁基过氧化氢对小梁细胞氧化应激的研究
作者:刘杏  文章来源:中山大学中山眼科中心  点击数205  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的 建立小梁细胞(iHTM)的叔丁基过氧化氢(tBHP)氧化应激模型,观察氧化应激后小梁细胞活性、细胞活性氧、糜蛋白酶样蛋白酶体复合物活性以及细胞凋亡的变化。
方法 体外培养正常小梁细胞系(iHTM),应用t-BHP刺激小梁细胞1和2h个小时,然后利用MTT法检测氧化损伤后小梁细胞的活性;流式细胞术检测小梁细胞活性氧水平;Suc-LLVY-荧光底物小梁细胞糜蛋白酶样蛋白酶体的活性;流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测小梁细胞的凋亡。
结果 正常人培养的小梁细胞呈梭形,折光性好,贴壁较牢;tBHP处理1h后部分细胞变圆,脱落,皱缩;tBHP处理2h后,大部分细胞变圆,皱缩,漂浮于培养液中。tBHP处理1h后,细胞活性较处对照组下降30.70% ± 1.5%;小梁细胞活性氧水平较对照组升高53.47 ± 1.75倍;小梁细胞糜蛋白酶样蛋白酶体的活性较对照组下降70.59% ± 0.88%。tBHP处理2h后,细胞活性下降42.12% ± 2.2%;小梁细胞活性氧水平较对照组升高121.81 ± 4.2倍;小梁细胞糜蛋白酶样蛋白酶体的活性较对照组下降74.93% ± 0.54%。正常人培养的小梁细胞凋亡细胞较少;经过tBHP处理1h,可见凋亡细胞增加,经tBHP处理2h,凋亡细胞增多更加明显。流式细胞术检测小梁细胞凋亡比例,对照组为3.0%±1.8%,经tBHP处理1h,凋亡细胞比例为28.23% ± 3.23%;tBHP处理2h,凋亡细胞比例为39.20% ± 5.91%(均P=0.000)。
结论 培养的人小梁细胞经过tBHP刺激后,小梁细胞的细胞活性明显下降,活性氧水平升高,糜蛋白酶样蛋白酶体活性降低,细胞凋亡水平明显增加。随着刺激时间的延长,上述改变更为明显。
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