| 目的：探讨L型钙通道阻滞剂尼莫地平对大鼠视网膜缺血－再灌注损伤后视网膜细胞凋亡相关基因的表达的影响。
方法：Wistar 大白鼠44只，随机分为4组，A组正常（空白）对照组2只，B组视网膜缺血－再灌注组（实验对照组）14只，C组视网膜缺血－再灌注＋尼莫地平组（实验组）14只，D组低压灌注组（假手术组）14只，以前房灌注升高眼内压的方法制备大鼠视网膜制备－再灌注模型，分别于再灌注发生后0时、2小时、6小时、12小时、24小时、72小时、168小时各处死2只大鼠（各4眼），4%多聚甲醛固定后石蜡包埋，每个标本切4μm切片2张，常规行caspase-3和bcl-2免疫组化染色，镜下观察，以Metamorph软件上分析，取平均光密度值统计分析。
结果：①caspase-3：视网膜caspase-3免疫组化阳性表达为细胞核呈棕黄色。 A组正常视网膜和D组低压灌注组caspase-3表达仅限于节细胞层、0-1个/高倍视野。B组2小时后可见节细胞层散在阳性，6小时后节细胞层内核层阳性核增加，至24小时达到顶峰，72小时仍可见多量细胞核着染，至168小时仍有细胞核呈棕黄色。C组：caspase-3表达趋势同B组。阳性细胞数及着染深度均小于B组。以Metamorph 图像分析软件进行图像分析后的平均光密度值行统计学分析表明：除0小时、168小时这两个时点外，其它各时点A、D组与B组、A、D组与C组、B组与C组间均同时具有统计学显著性（P＜0.05）。A组与D组间无统计学显著性。
②bcl-2：视网膜bcl-2阳性表达为棕色颗粒着染，位于神经纤维层，内丛状层，外丛状层，视锥视杆层，以及内、外核层的细胞核之间（即位于细胞浆和细胞突起）。A组、D组几乎无表达。B组：再灌注2小时后即可见神经纤维层，节细胞层，内丛状层染色阳性，随着时间推移，染色渐加深，并逐渐向视网膜外层扩展，最终达外丛状层，至24小时达到高峰，72小时后逐渐下降。C组：时间变化趋势同B组，但较B组染色深。再灌注2小时，即可见明显的神经纤维层和内丛状层着色，至24小时，可见大量的bcl-2沉淀于外界膜下和视锥视杆层。至一周时仍未达到基线水平。经metamorph软件进行图像分析后进行统计分析检验，可见B组与C组，B组与A组，C组与A、D组间存在统计学显著性。
结论：视网膜缺血－再灌注损伤后视网膜组织有促凋亡基因caspase-3和表达抗凋亡基因bcl-2的拮抗表达。尼莫地平可使caspase-3表达下调，并上调bcl-2的表达，提示尼莫地平对视网膜缺血－再灌注损伤的保护作用是通过影响凋亡相关基因的表达来实现的。
|
