目的  （1） 体外培养人羊膜间充质干细胞（HAMSCs） ，筛选冻存HAMSCs效果较好的冻存液配方。（2）将HAMSCs 种植到新鲜猪角膜基质上，使之复层化，探讨利用HAMSCs和猪角膜基质重建角膜表层的可行性。
方法  （1）分离，培养HAMSCs，形态学观察和免疫表型鉴定。（2）将第3代HAMSCs分为 4组 ,分别加入4种不同组成的冻存液：A组: 70%DMEM /F12 + 20%胎牛血清 + 10% DMSO，B组：80%DMEM/F12+10%胎牛血清+10%DMSO，C组：40% DMEM/F12+45%胎牛血清+15%DMSO，D组：45% DMEM/F12+50%胎牛血清+5%DMSO，调整细胞密度为 5 × 10⁶/mL，一80℃冰箱保存，1个月后复苏，Am-Blue法测量各组吸光度值（OD值），重复三次。(3) 将种植于去角膜上皮细胞的猪角膜基质片上的第 3 代 HAMSCs培养至 80%～90%融合时，移至插入式培养皿，气液界面培养14d，将猪角膜基质片进行固定、切片、HE 染色和 CK3+12 免疫组化及免疫荧光检测。
结果  （1）HAMSCs可以在体外培养扩增，抗原结果显示 CD29、CD44、CD73、CD90、CD105 表达阳性，CD31、CD34、CD45、HLA-DR 表达阴性，Vimentin、SSEA-3、SSEA-4、OCT-4、telomerase 结果阳性。（2）C组冻存液与其他三组相比复苏后HAMSCs存活贴壁的数目最多（F= 26.783,C组与其他三组比较，P均<0.05）。（3）HAMSCs 在去角膜上皮细胞的猪角膜基质片上形成单层细胞后再气液界面共培养 14d ，可形成 约3 层的复层细胞，实验组 CK3+12 免疫组化及免疫荧光检测阳性。
结论  （1）HAMSCs在体外可以成功原代和传代培养，体外培养的HAMSCs有很强的增殖能力。（2）C组即配方为40% DMEM / F12 + 45%胎牛血清 + 15%DMSO的冻存液冻存复苏HAMSCs后细胞的成活率最高 ( P <0.05)。（3）新鲜猪角膜基质为 HAMSCs 转变为类似于角膜上皮细胞的形态提供了微环境，气-液界面培养法能使新鲜猪角膜基质上的单层细胞复层化，形成类似于正常角膜上皮样复层结构，初步构建了复层上皮细胞-角膜基质移植材料。