研究目的 通过体外实验,对照研究霉酚酸酯(MMF)和环孢霉素A(CsA)对体外培养人结膜杯状细胞及其MUCIN5AC分泌功能的影响;从分子水平阐述两种药物对干眼起治疗作用的可能机制。
研究方法 不同浓度的MMF和CsA分别与体外培养的高纯度人结膜杯状细胞共培养。24小时后,Cell Count Kit-8(CCK-8)测定细胞增殖;巢式Taqman PCR(QNRT-PCR)测定细胞内MUCIN5ACmRNA表达水平。
结果 (1)MMF双向调控人结膜杯状细胞增殖(P<0.05),剂量依赖性上调MUCIN5ACmRNA表达(P<0.05)。MMF对细胞增殖功能的双向调控表现为:与对照组(0加药组)相比,0.25-1ng/ml组显著促进细胞增殖;2.5-10ng/ml组,对细胞数量无明显影响;25-100ng/ml组显著抑制细胞增殖。(2)CsA对结膜杯状细胞的增殖无明显影响(P>0.05),但双向调控MUCIN5ACmRNA表达(P<0.05): 与对照组(0加药组)比较,25ng/ml组显著下调MUCIN5ACmRNA表达;0.25ng/ml、2.5ng/ml组表现出显著上调作用。(3)0.25ng/ml是MMF和CsA正向调控杯状细胞及MUCIN5AC分泌功能的最低有效浓度。(4) 0.25ng/ml-2.5ng/MMF和CsA均可在不表现细胞毒性的前提下,正向调控MUCIN5ACmRNA表达;与相同浓度CsA比较,0.25ng/ml、0.5ng/ml组MMF对杯状细胞的增殖和MUCIN5AC分泌均表现出更显著的正向调控能力(P<0.05)。
结论 (1)MMF双向调控体外培养结膜杯状细胞增殖,上调MUCIN5ACmRNA表达。(2)CsA对体外培养结膜杯状细胞增殖无明显影响,可双向调控MUCIN5ACmRNA表达。(3)低浓度MMF和CsA更有利于促进体外培养结膜杯状细胞及其分泌功能,在干眼治疗中具有较广阔的应用前景。 |