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慢病毒载体用于眼部基因转移的实验研究
作者:刘影  文章来源:上海第十人民医院眼科  点击数255  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 以慢病毒(Lentivirus,LV)为载体介导报告基因和外源基因转移,观察其体外感染效率,病毒滴度及感染时间对感染效率的影响以及对视网膜色素上皮细胞的毒性作用。探讨将外源基因转入视网膜组织的可行性,为今后慢病毒载体用于眼部新生血管性疾病的治疗提供前期研究基础。
方法 含绿色荧光蛋白(GFP)和内皮抑素(ES)两种外源基因及巨细胞病毒和视紫红质两种不同启动子的LV载体,在体外感染人视网膜色素上皮(RPE)细胞,眼内行玻璃体腔注射。评价其感染效率;了解LV载体对RPE细胞的毒性作用。观察其在眼部的转染效果。
结果 随病毒滴度增加和感染时间延长,表达GFP的RPE细胞数和荧光强度增加;随病毒滴度增加,RPE细胞内ES mRNA增加。一定剂量范围内病毒对细胞增殖及超微结构无明显影响。LV通过玻璃体腔注射介导GFP基因转移可见视网膜荧光表达。
结论 慢病毒能有效、特异地介导外源基因感染RPE细胞,且其表达呈剂量依赖性和时间依赖性。慢病毒在一定剂量范围内对RPE细胞增殖无明显影响。LV玻璃体腔注射可有效介导外源基因转入视网膜。

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