目的 观察冰片对大鼠血-视神经屏障通透性的影响,研究冰片对血-视神经屏障的作用机制。
方法 ①合成冰片(0.5g/kg)溶媒灌胃,荧光分光光度法检测视神经内不同时间点示踪剂伊文思兰的浓度;②电镜观察冰片作用后各时间点血-视神经屏障内超微结构变化;③免疫荧光法测定视神经内紧密连接膜蛋白的表达;④RT-PCR和Western blot法定量分析冰片灌胃后紧密连接膜蛋白的变化。
结果 ①大鼠冰片灌胃30min时视神经内伊文思兰含量升高(20.53±1.01μg/g,p<0.01),1h时伊文思兰含量达高峰(29.11±1.74μg/g,P<0.01),8h时恢复(4.69±0.34μg/g,P>0.05);②冰片灌胃30min时吞饮小泡数量增加(58.5±5.47,P<0.01),紧密连接出现缝隙;1h吞饮小泡继续增多(81.33±4.68,P<0.01),紧密连接缝隙变宽、变多;8h恢复至正常水平(29.33±2.58,P>0.05),紧密连接恢复连续完整的结构;③Claudin-1在冰片灌胃30min后开始由细胞膜向细胞质转移并在1h时达到高峰,Occludin亦于此时间段内少量向细胞质内移动;4h时胞质内两种荧光蛋白颗粒开始减退;8h后恢复成正常的荧光形态。④冰片灌胃与空白对照灌胃RT-PCR结果均显示Claudin-1和Occludin的mRNA表达在灌胃前及灌胃后8h内变化无显著性差异(F值分别为0.875、0.174, P均>0.05);Western结果亦显示两组在灌胃前及灌胃后的8h内,Claudin-1及Occludin的蛋白表达变化无显著性差异(F值分别为0.242、0.117, P均>0.05)。
结论 该浓度的冰片能够可逆性开放血-视神经屏障,这种作用可能与紧密连接开放和吞饮小泡增加有关;冰片干预下血-视神经屏障的Claudin-1与Occludin发生重新分布并呈可逆性,Claudin-1可能在冰片开放屏障过程中发挥重要作用。 |