目的:探讨以人羊膜为载体体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)行猫眼角膜内皮细胞移植的可行性。从而为临床治疗角膜内皮失代偿性疾病提供一种新的有效的治疗方法。
方法:HUVEC体外培养成功后,取传三代的细胞接种于去除上皮的羊膜上。羊膜上细胞融合成单层后行猫眼角膜内皮细胞移植,以探讨体外培养的HUVEC在猫眼体内生长状态及其生理功能。术后每日在裂隙灯显微镜下观察植片变化,每周两次以超声角膜厚度仪检测角膜厚度。分别于术后2周、1月、2月、3月取透明植片进行光学显微镜、透射电镜和扫描电镜观察。并以VIII因子免疫组化染色和3H-TDR放射自显影技术对术后植片内皮细胞进行鉴定。
结果:种植在羊膜上的HUVEC约4-5天可形成单层结构,细胞密度大于1800个细胞/mm2。内皮细胞移植术后一周内14例猫角膜植片轻度水肿,角膜厚度和透明性接近正常角膜,在3个月的观察期内角膜维持透明和正常厚度。术后组织学检查示植片内皮细胞呈连续单层,扫描电镜见细胞呈多边形,细胞间连接紧密,透射电镜下细胞与羊膜紧密相贴。VIII因子免疫组化染色和3H-TDR放射自显影技术示植片内皮细胞与培养的HUVEC为同源性。
结论:1. HUVEC在除去上皮的羊膜上可形成良好的单层结构;2.培养在羊膜上的HUVEC的密度及组织学结构与正常角膜内皮细胞相似;3.体外培养的HUVEC代替猫角膜内皮细胞移植在体内可行使角膜内皮细胞的功能,维持角膜正常厚度和透明性;4.羊膜作为一种良好的生物载体可用于角膜内皮细胞的体外培养、移植。
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