目的 探讨建立体外培养人视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelial,RPE)蓝光损伤模型的方法。
方法 将体外培养的第四代人RPE细胞随机分为A、B两组,采用自制医用蓝光灯管发光装置进行照射,其中A组:光照强度为2000±500 Lux,终止培养时间为12h,根据不同光照时间再分为A0:对照组;A3:光照3h;A6:光照6h;A9:光照9h;A12:光照12h。B组:光照强度为2000±500 Lux,终止培养时间为24h,根据不同光照时间再分为B0、B3、B6、B9、B12组。采用倒置显微镜观察RPE细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡,计算凋亡指数(apoptotic index, AI)。
结果 12h终止培养组:无光照、光照3、6h未见明显的细胞凋亡,光照9、12h出现了一定数量的凋亡细胞。光照6h、9h、12h组AI与无光照组相比均有统计学意义(P=0.000,0.000,0.000),光照3h与无光照组相比无统计学意义 (P=0.162), 光照9、12h组与6h组比较均有统计学意义(P=0.000,0.000)。24h终止培养组:光照6h开始,细胞已出现大量的凋亡,镜下见凋亡细胞细胞核浓缩,细胞核被深染、碎裂,边集成新月形或帽状,光照9h 开始细胞已有坏死出现,12h时已出现较多坏死细胞,染色质边集,核膜破裂,细胞形状消失,可见细胞碎片。光照3h、6h、9h、12h组AI与无光照组相比均有统计学意义(P=0.000,0.000,0.000,0.000),光照6、9、12h组与3h组比较均有统计学意义(P=0.000,0.000,0.000)。
结论 12h终止培养组光照9h,24h终止培养组光照6h易诱导人RPE细胞凋亡,由于后者光照时间短,易于控制培养箱温度,因此,光照强度2000±500Lux,光照6h,终止培养24h为建立蓝光照射致人RPE细胞损伤模型的最适合条件。 |