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KAI1对RB细胞粘附、迁移和侵袭的影响
作者:闫慧  文章来源:上海交通大学医学院附属新华医院眼科  点击数264  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 研究肿瘤转移抑制基因KAI1对视网膜母细胞瘤细胞株HXO-Rb44Y79细胞粘附、迁移和侵袭的影响。

方法 用含KAI1的慢病毒载体转染稳定表达GFP和荧光素酶的HXO-Rb44细胞株HXO-Rb44-GFP-luc联合嘌呤霉素筛选建立稳定表达KAI1稳转细胞HXO-Rb44-GlKAI1;以表达GFP的慢病毒载体转染HXO-Rb44-GFP-luc,建立稳转细胞HXO-Rb44-GlGFP,作为HXO-Rb44-GlKAI1的对照细胞。同法建立稳转细胞Y79-GKAI1Y79-GFPPCRWestern blot观察各细胞KAI1的表达情况。光镜下观察上述细胞粘附的改变。Transwell迁移验检测HXO-Rb44-GlKAI1HXO-Rb44-GlGFPHXO-Rb44-GFP-lucY79-GKAI1Y79-GFPY79细胞的迁移能力。Transwell侵袭实验检测上述细胞的侵袭力。

结果 PCRWestern blot显示HXO-Rb44-GlKAI1Y79-GKAI1细胞表达KAI1HXO-Rb44-GlGFPHXO-Rb44-GFP-lucY79-GFPY79弱表达KAI1粘附验:HXO-Rb44-GlKAI1Y79-GlKAI1细胞的粘附性明显强于对照细胞。Transwell迁移验:上室中加入DMEM1640培养基200μlRb44细胞100μl24小时后下室中100倍视野下的细胞数:HXO-Rb44-GlKAI1组平均为17.60±2.52HXO-Rb44-GlGFP组为 44.75±7.85HXO-Rb44-GFP-luc组为53.20±7.70χ2=43.80P<0.0001)。上室中加入DMEM1640培养基200μlY79细胞100μl48小时后下室中200倍视野下的细胞数:Y79-GKAI1组平均为17.35±4.46Y79-GFP组为47.05±6.13Y79组为53.30±5.30χ2=43.51P<0.0001)。Transwell侵袭实验:上室中matrigel浓度为20%上室中加入DMEM1640培养基200μlRb44细胞100μl24小时后下室中100倍视野下的细胞数:HXO-Rb44-GlKAI1组平均为4.60±2.70HXO-Rb44-GlGFP组为33.65±12.70, HXO-Rb44-GFP-luc组为44.70±11.80χ2=43.07,P<0.0001)。上室中matrigel胶浓度为20%,上室中加入DMEM1640培养基200μlY79细胞100μl48小时后下室中200倍视野下的细胞数:Y79-GKAI1组平均为7.50±3.05Y79-GFP组为24.40±6.58Y79组为37.45±7.13χ2=47.73P<0.0001)。

结论  KAI1可以显著增强HXO-Rb44Y79细胞的同质细胞间的粘附力,降低HXO-Rb44Y79细胞的侵袭力和迁移力。

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