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雷公藤内脂醇对体外培养血管内皮细胞增殖抑制作用的研究
作者:张杰 赵庆…  文章来源:山东潍坊医学院附属医院眼科中心 261042  点击数1661  更新时间:2004/6/14  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的:探讨雷公藤内酯醇体外对培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)增殖的抑制作用及可能的作用机理,为临床角膜新生血管性疾病提供一种有效的治疗方法。 方法:从人脐带获取HUVEC,体外培养成功后,在细胞增殖的同时分别加入不同浓度的雷公藤内酯醇,每日倒置显微镜下观察细胞形态及生长状况,并测细胞增殖曲线。以3H-TdR掺入技术,研究雷公藤内酯醇对血管内皮细胞DNA合成的抑制作用,并以琼脂打孔细胞接种方法检测不同浓度雷公藤内酯醇对HUVEC游走的抑制作用。以免疫组化方法检测正常HUVEC及加入不同浓度雷公藤内酯醇后对血管内皮细胞分泌tPA、uPA、PAI-1的影响。以原位分子杂交方法检测不同浓度雷公藤内酯醇对血管内皮细胞c-fos基因mRNA表达的抑制作用,以进一步探讨雷公藤内酯醇对新生血管生成的抑制作用。通过透射电镜观察雷公藤内酯醇对HUVEC超微结构的影响。 结果:雷公藤内酯醇可呈剂量依赖性的使3H-TdR掺入值下降,抑制HUVEC的增殖、游走。免疫组化染色结果表明雷公藤内酯醇可明显抑制HUVEC tPA、uPA、PAI-1的表达,并呈剂量依赖性。c-fos原位分子杂交染色结果表明正常HUVEC c-fos mRNA表达阳性,加入雷公藤内酯醇后呈剂量依赖性的抑制c-fos mRNA的表达。透射电镜观察发现雷公藤内酯醇可对HUVEC产生损伤性影响,引起细胞核固缩、内质网脱颗粒、线粒体空泡样变等,甚至细胞坏死。 结论:1.雷公藤内酯醇体外可明显抑制HUVEC的增殖、游走;2.雷公藤内酯醇可呈剂量依赖性的抑制HUVEC分泌tPA、uPA和PAI-1,可能减少细胞外基质的降解;3.雷公藤内酯醇可能通过抑制c-fos基因表达进而影响转录因子AP-1的形成。4.雷公藤内酯醇是一具有潜力的角膜新生血管抑制剂。
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