目的:从临床及动物实验两方面研究细胞色素C在氧化损伤致晶状体上皮细胞(LECs)凋亡发生中的作用,并观察牛磺酸对线粒体细胞色素C释放和晶状体上皮细胞凋亡的影响,为临床年龄相关性白内障的防治提供理论依据。方法:采用离体晶状体培养技术,将60只大鼠晶状体平均分为正常组、H2O2诱导组及牛磺酸+H2O2组,于3h、6h、12h、24h分别观察晶状体混浊情况;采集行ECCE术的年龄相关性白内障患者及H2O2、牛磺酸+H2O2处理的鼠晶状体前囊膜,采用免疫组化SP法检测LECs细胞色素C的表达,TUNEL法检测LECs凋亡的发生,行透射电镜观察,并以正常晶状体前囊膜为对照组。结果: (1)随H2O2 作用时间的延长,晶状体混浊度加重,牛磺酸能显著抑制晶状体混浊的发生。(2)正常人LECs胞浆被染为淡黄色,白内障组可见散在分布的胞浆棕黄色染色细胞,差异有显著性(P﹤0.01); H2O2组作用3小时,即可见棕黄色染色细胞数明显增多,牛磺酸+H2O2组作用3小时,棕黄色细胞数较H2O2组明显减少。且随培养时间的延长,棕黄色染色细胞数逐渐增多。同一时间点两组比较,差异有显著性(P﹤0.05)。(3)正常人LECs几乎未见凋亡细胞,白内障组可见核染为棕黄色的凋亡细胞,差异有显著性(P﹤0.01);H2O2组作用3小时即可见凋亡细胞,牛磺酸+H2O2组作用3小时,几乎未见凋亡细胞。且随培养时间的延长,凋亡细胞数逐渐增多。同一时间点两组比较,差异有显著性(P﹤0.01)。(4)细胞色素C与凋亡的表达存在高度正相关性(P﹤0.05),且前者的显著表达在时间上要早于后者。(5)白内障组凋亡细胞染色质浓缩成团块状并聚集在核膜下,可见凋亡小体,胞浆内部分线粒体嵴断裂消失、髓样变及空泡样变。正常对照组细胞染色质均匀无凝缩,细胞器形态结构正常。结论:(1)晶状体上皮细胞凋亡是年龄相关性白内障形成的细胞学基础。(2) 线粒体细胞色素C释放凋亡途径可能参与晶状体上皮细胞凋亡的过程。(3) 牛磺酸可抑制线粒体细胞色素C释放,从而抑制晶状体上皮细胞凋亡的发生,减缓白内障的发生发展。 |