目的 视乳头星形胶质细胞激活在青光眼视神经病变中的作用受到越来越多的关注,而星形胶质细胞激活后如何参与青光眼视神经病变的分子机制尚未阐明。为此,我们研究了纯化培养的成人视乳头星形胶质细胞激活后基因表达谱的改变,以期为全面揭示青光眼视神经病变发病的分子机制提供实验数据。
方法 取成人视神经乳头,分离筛板,采用组织块培养法和星形胶质细胞选择性培养基纯化培养成人视乳头星形胶质细胞。 以PIC激活星形胶质细胞,在星形胶质细胞暴露于PIC后6、24、48小时后分别经倒置相差显微镜观察形态学改变、GFAP免疫荧光染色鉴定细胞激活状态。同时收集细胞抽取全mRNA,采用oligonucleotide Affymetrix microarray (HG U133A & HG U133A 2.0 chips)进行基因芯片研究,分析比较视乳头星形胶质细胞激活后基因表达水平的变化。基因表达水平改变明显的应用SAM(statistical Analysis of Microarray)进一步分析。对于高于或低于平均基因表达水平1.5倍者采用real-time PCR进行验证mRNA表达,westernblot和Elisa方法检测蛋白含量,并通过粘附和移行实验检测细胞激活后移行的改变。
结果 星形胶质细胞激活后517个基因表达发生上调或下调(p<0.01)。按照功能将这些基因分类,主要包括:信号转导如Rho通路、Ras p21通路、酪氨酸激酶通路、丝氨酸苏氨酸激酶通路等,ECM基因,以及调控应激反应、细胞粘附和移行的基因等。
结论 实验数据提示星形胶质细胞激活后基因谱表达发生了改变,这些变化影响星形胶质细胞在视乳头的正常形态和功能,从而参与了青光眼视神经病变过程。
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