目的 本实验通过观察robo1和slit2在增殖性糖尿病视网膜病变纤维增殖膜中的作用以及糖基化终产物对人视网膜色素上皮细胞中robo1,slit2表达的影响,重组N-slit2蛋白对人视网膜色素上皮细胞活性的影响,探讨slit/robo信号在糖尿病视网膜病变中的作用。
方法 我们应用用免疫荧光双重染色的方法观察robo1和slit2在糖尿病纤维增殖膜中的表达情况以及表达部位,同时实时定量PCR,western blotting以及ELISA检测不同浓度糖基化终产物和PI3K抑制剂LY294002作用下robo1和slit2在人视网膜色素上皮细胞中的表达变化情况,通过MTT,Boyden小室和流式细胞术来观察视网膜色素上皮细胞在重组N-slit2蛋白体外干预下对细胞的增殖,迁移和周期变化的影响。
结果 在糖尿病视网膜病变的纤维增殖膜中robo1和slit2与RPE细胞是共表达的,同时糖基化终产物能增加RPE细胞中robo1和slit2的表达情况,这种表达可以被PI3K的抑制剂LY294002所阻断,我们的实验还发现重组N-slit2蛋白增加色素上皮细胞的增殖,粘附和迁移以及处于S期的细胞百分比。
结论 Robo1和slit2在糖尿病纤维增殖膜的形成中起了重要的作用,糖基化终产物通过PI3K/Akt信号通路来增加robo1和slit2在RPE中的表达,重组N-slit2蛋白增加RPE细胞的生物学活性,slit/robo信号在糖尿病视网膜病变的发展中起着重要作用。 |