目的 比较正常与氧化损伤视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium cell,RPE)的局部补体成分C3a及补体调节蛋白—补体因子F(complement factor H,CFH)的表达。
方法 利用人血清作为体外补体激活反应系统的来源,常规培养ARPE-19(ATCC,美国)细胞至细胞融合后,用500mM浓度H2O2对RPE细胞进行氧化损伤处理24h,未处理的细胞为正常对照组,将细胞用PBS洗涤后,加入适量血清在37℃反应60min,用ELISA测定血清中补体C3a的激活水平。另外将500mM 浓度H2O2处理24h的ARPE-19细胞分别用实时荧光定量PCR(real time RT-PCR),蛋白免疫印迹(western blot)检测ARPE-19细胞中CFH的mRNA和蛋白水平。
结果 ELISA结果显示H2O2处理后的ARPE-19细胞较正常组C3a的表达上升(P<0.05)。real time RT-PCR和western blot结果均表明ARPE-19细胞在H2O2作用下与正常未处理细胞相比(P<0.05),CFH的表达水平下降。
结论 氧化损伤RPE细胞能激活局部补体系统,成为启动补体激活的因素,另一方面也导致具有抑制补体系统激活效应的CFH表达下降,使RPE细胞局部补体系统调节失控从而激活补体系统,最终导致慢性炎症,这可能是老年性黄斑变性的病理机制。 |