目的 研究小鼠眼部微环境诱导CD4⁺CD25⁺ Foxp3⁺调节性T细胞(regulatory T cell, Treg细胞)形成机理及其与眼免疫耐受的关系。
方法 实验选用OVA-抗原受体转基因小鼠（OVA-TCR-Tg）右眼房内注射OVA制作免疫性葡萄膜炎模型，注射前及注射后2天、4天、6天处死小鼠，取右眼眼球剪除外周球结膜组织，去除晶状体，胶原酶消化后制作全眼球单细胞悬液；另外取右侧颌下与颈部引流淋巴结制作单细胞悬液。应用流式细胞术检测小鼠眼内Treg细胞的表达情况，以及注射眼同侧引流淋巴结内Treg细胞的表达。取正常小鼠脾脏，免疫磁珠分离naiveCD4+T细胞，在anti-CD3刺激下，分别在小鼠眼房水（2.5倍稀释）、0ng/ml、0.5 ng/ml、1ng/ml、4ng/ml、20ng/ml、100ng/ml TGFb-1个组培养液中进行体外培养48小时。应用流式细胞仪技术检测各组Treg细胞百分率，并分析不同条件下平均Foxp3⁺Mean fluorescence intensity（MFI）的区别。
结果 体内试验显示正常小鼠眼内含有极微量的CD4+T细胞，其中Treg细胞占CD4+细胞百分率为5.4%±0.2%，引流淋巴结中Treg细胞百分率为8.2±1.6%。眼前房注射OVA后2天、4天、6天眼内Treg细胞百分率分别为：60.2%±3.5%、32.2%±2.8%、28.4%±2.2%,引流淋巴结内Treg细胞百分率分别为：5.8%±0.8%、5.1%±0.6%，3.8±0.3%。注射前后眼内Treg细胞百分率较注射前显著增长（p<0.05）,注射后眼内Treg细胞百分率远高于淋巴结内Treg细胞百分率（p<0.05）。体外实验显示2.5×房水刺激组Foxp3⁺Treg细胞百分率为8.4%±1.2%，2.5×房水诱导Treg细胞形成的能力约等于0.5 ng/ml TGFb-1组，但是其Foxp3⁺的MFI却高达70±2，超过了20ng/ml TGFb-1组（MFI=66±3）。
结论 眼内发生免疫应答反应时会形成较多CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞，这些Treg细胞并不单纯来自于引流淋巴结，而是在眼内特殊免疫微环境中被诱导产生；眼部微环境诱导的Treg细胞其Foxp3⁺的免疫抑制功能较强，这很可能是眼具有免疫赦免功能的重要原因。