目的 (1)进一步优化人羊膜上皮细胞（hAECs）体外培养方法；(2).利用正交设计实验探讨羊膜组织供体的孕周、孕龄和胎盘部位对hAECs增殖活性的影响，寻找活性较好的细胞来源；(3).利用正交设计实验研究EGF、bFGF和IGF-I对培养hAECs的促增殖作用，寻求合适的培养基条件。
方法 (1)采用酶消化法培养人羊膜上皮细胞（hAECs），按照不同的胶原酶和胰酶消化时间分离hAECs，倒置显微镜观察hAECs贴壁和生长情况.(2)选择可能影响hAECs体外增殖活性的3个羊膜组织因素：孕周、孕龄、胎盘部位，每个因素分为3个水平，按照正交设计表格L9（34）安排实验， Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测hAECs细胞增殖活性，以OD值为考察指标；(3)选择可能促培养hAECs增殖的3个生长因子：EGF、bFGF、IGF-I，每个研究因素分为3个浓度水平：2.5ng/ml、5.0ng/ml、10.0ng/ml，按照正交设计表L9（34）安排实验，以Am-Blue细胞增殖与活性检测试剂检测hAECs增殖活性，以OD值作为考察指标。
结果 (1).酶消化法可以分离获得人羊膜上皮细胞，体外培养12h，hAECs贴壁良好并伸展，呈圆形或椭圆形，培养 24h的hAECs呈多形性, 体积变大并可见核分裂像；培养48h的hAECs之间连接紧密，大部分已融合成片，可以培养传代6～8代。(2).对OD值应用正交设计的方差分析，结果显示：不同孕周、胎盘部位来源人羊膜组织所获得的hAECs体外增殖活性不同，差别有统计学意义(P<0.05），孕龄对羊膜上皮细胞增殖活性无影响(P>0.05），三个因素对羊膜上皮细胞增殖活性大小依次为：胎盘部位>孕周（w）>孕龄(岁)；(3).对OD值运用正交设计的方差分析，结果显示：EGF、IGF-1在研究浓度范围内对hAECs的促增殖作用统计学意义(P<0.05)，bFGF促增殖作用无统计学意义(P>0.05)，其对体外培养羊膜上皮细胞影响作用依次为：IGF-1> EGF>bFGF。
结论 (1).先用胶原酶Ⅱ消化、再用胰蛋白酶消化进行分步酶联合消化方法可以在短时间内获得较多活性较好的hAECs，增加胶原酶的消化时间、减少胰蛋白酶消化时间可以提高hAECs的分离效率和体外增殖活性；(2).体外增殖活性较好的hAECs来源于孕周是37~38周、胎盘中间1/3部位的羊膜组织，孕龄对hAECs增殖活性没有影响；(3).5.0ng/ml EGF、5.0ng/ml IGF-1是最大促进增殖作用的最小浓度，各个生长因子促进hAECs增殖的作用依次为：IGF-1> EGF >bFGF，联合应用对hAECs体外促增殖作用更好。