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抗Ⅳ胶原抗体与金雀异黄素偶联方法的建立及测定
作者:刘芳 孔君…  文章来源:中国医科大学附属第一医院眼科 110001  点击数1212  更新时间:2004/6/14  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的:为药物预防后发障提供了一条新途径,为进一步免疫组化及动物试验打好基础。 方法:采用活性酯法,先把金雀异黄素与活性酯反应,生成金雀异黄素-活性酯结合物,然后将结合物与抗Ⅳ胶原抗体结合,生成抗Ⅳ胶原抗体与金雀异黄素偶联物;用紫外分光光度仪分别测金雀异黄素及抗Ⅳ胶原抗体的紫外吸收峰,做出金雀异黄素的标准曲线。用Comassta亮兰法用牛血清白蛋白作标准曲线;采用透析及SaphpdexG25柱层分离方法分离偶联物,用PBS洗脱,收集2ml/管,共收集40管,各管置UV-1601紫外分光光度计中测OD280及OD264,分别绘制曲线;根据所测偶联物中所含抗体与金雀异黄素的浓度,计算两者的克分子比值。 结果:金雀异黄素在264nm有最大吸收峰,抗Ⅳ胶原抗体在280nm有最大吸收峰;从SaphpdexG25柱层分离纯化后从第5~11管淋洗液同时在280nm和264nm有最大吸收峰,是单抗与金雀异黄素的免疫偶联产物,间接证明单抗与金雀异黄素已结合为同一个分子。各管的OD280及OD264所作的双曲线中,可见两个曲线较为接近,说明偶联效果较佳。金雀异黄素与单抗的克分子比值等于5.2。 结论:活性酯法可成功的将单抗与金雀异黄素偶联,偶联效果良好
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