目的 检测角膜上皮干/祖细胞的分化过程中细胞内的氧化应激水平变化。
方法 体外培养角膜上皮干/祖细胞TKE2细胞，分别用正常KSFM TKE2培养液，添加0.9mM Ca2+的KSFM培养液及含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液培养细胞3天后，观察并照相记录细胞的生长形态；流式细胞技术及免疫细胞荧光技术检测各组TKE2细胞干细胞标记分子p63、ABCG2的表达情况；采用DCFH-DA标记细胞内的活性氧，分别用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计检测不同培养条件下细胞内的氧化应激水平变化。
结果 正常KSFM培养液培养的对照组TKE2细胞体积小，核质比大，细胞呈鹅卵石样形态；细胞表达干细胞标记分子P63、ABCG2，细胞内的活性氧水平较低。采用添加0.9mM Ca2+的KSFM培养液培养的TKE2细胞体积较对照组有所增大，细胞较为伸展；细胞内干细胞标记分子p63、ABCG2的表达变弱；而细胞内的活性氧水平明显升高。采用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液培养的TKE2细胞体积显著变大，核质比小，细胞扁平伸展；细胞几乎不表达干细胞标记分子p63、ABCG2；而细胞内的活性氧水平增高更为明显。
结论 角膜上皮干/祖细胞的分化过程中，伴随着细胞内的氧化应激水平的升高。