目的 检测眼表紊乱中主要炎症分子和氧化应激压力对角膜上皮干/祖细胞分化状态的影响。
方法 体外培养角膜上皮干/祖细胞TKE2细胞,分别用正常KSFM培养液、添加有γ-IFN、TNF-alpha、IL-1beta、或不同浓度H2O2的KSFM培养液培养3天,观察并照相记录细胞的生长形态;采用细胞计数、流式细胞技术及免疫细胞荧光技术检测各组TKE2细胞干细胞标记分子p63、ABCG2的表达情况;采用DCFH-DA标记细胞内的活性氧,分别用激光共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光分光光度计检测不同培养条件下细胞内的氧化应激水平变化。
结果 正常培养的TKE2细胞体积小、核质比大,细胞高表达干细胞标记分子P63、ABCG2,细胞内的活性氧水平较低,表现为干细胞表型;而经不同炎症因子及H2O2处理后,TKE2细胞较对照组有不同程度地体积增大,核质比变小,细胞变得扁平伸展;细胞内干细胞标记分子p63、ABCG2的表达变弱;而细胞内的活性氧水平则明显升高。其中炎症因子γ-IFN对TKE2的影响最为显著。
结论 眼表炎症及氧化应激压力能够影响角膜上皮干/祖细胞的分化。 |