目的 比较人、牛、羊、骆驼四种物种的泪液蛋白质组,寻找和鉴定不同物种之间泪液中的差异表达蛋白,并比较骆驼泪液蛋白在冬夏季的差别。
方法 收集人、牛、羊、骆驼(夏季及冬季)的泪液,纯化蛋白质,进行双向电泳,选取匹配点和差异点行胶内酶解和基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF)分析,联合de novo测序和同源性搜索鉴定差异蛋白,最后行western-blot确认差异蛋白的表达。
结果 人、牛、羊、骆驼泪液蛋白的二维电泳图谱分布不同,分别找到182±6点、223±8点、217±11点、241±3点,相应匹配点的质谱分析提示四种泪液蛋白的主要丰度蛋白成分相似,鉴定出免疫球蛋白、溶菌酶、乳铁蛋白等,并发现同源性的卵黄膜外层蛋白1(vitelline membrane outer layer protein 1,简称VMO1)在各物种泪液中差异性表达,其存在于骆驼和羊的泪液中,但不存在于人和牛的泪液中;与冬季相比,夏季骆驼泪液中乳铁蛋白表达下调,VMO1表达上调。
结论 人、牛、羊、骆驼四种物种泪液以及冬夏季骆驼泪液之间存在蛋白质组表达差异,对泪液蛋白质的分析为我们筛选相关眼病的分子标志物及寻找新的治疗途径提供依据。 |