目的 以去细胞羊膜为单层细胞移植载体,建立经外路视网膜下移植模型,探索骨髓间充质干细胞视网膜下单层移植的可行性,并观察其在视网膜下的分化状态。
方法 50只BN大鼠(50只眼)随机分成5组,每组10只眼: A组为骨髓间充质干细胞组;B组为RPE组;C组为成纤维细胞组;D组为单纯移植去细胞羊膜组;F组为假手术组。采用贴壁筛选法分离、培养BN大鼠骨髓MSCs。将慢病毒转染GFP的大鼠MSCs,RPE细胞和成纤维细胞接种于去细胞羊膜表面培养72小时,经外路视网膜下移植植片。术后14 d,28d处死大鼠,取新鲜眼球,连续冰冻切片,分别检测GFP,CD44,CD45,MAP-2, Calbindin, Rhodopsin, RPE-65,GFAP,MAP-2,PKC,Vimentin进行免疫荧光观察。
结果 该移植模型的手术并发症主要有视网膜下出血,植片脱入玻璃体腔或脉络膜下腔。移植成功的模型术后7-10d 视网膜复位良好,植片在位。移植4周时,羊膜部分吸收,手术局部 RPE层破坏,未见周边RPE 过度增殖、迁移。移植部位神经视网膜各层结构基本完整,移植物周边未见新生小血管长入。移植术后4周移植的MSCs GFP表达阳性,MSCs特异性抗体未见阳性表达,特异性表达RPE-65,神经视网膜相关细胞抗体未见阳性表达。
结论 以去细胞羊膜为载体的视网膜下移植是一种视网膜下移植单层细胞的可行模型,骨髓间充质干细胞在视网膜下呈现分化状态,并表现出一定的向RPE细胞分化的潜能。
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