目的 研究胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein ,GFAP)和谷氨酰胺合成酶(glutamamine synthetase, GS)在细胞外高浓度谷氨酸的环境下对Müller细胞转运代谢谷氨酸的作用, 发现其变化并进一步分析谷氨酸发生细胞毒性的原因。
方法 恒温摇床法纯化体外原代培养的大鼠视网膜Müller细胞,在传代早期Müller细胞的培养基内加入高浓度的谷氨酸(1.5mM)MTT比色法测定细胞的活力, HE染色,观察细胞形态;免疫细胞化学染色联合灰度分析观察在高浓度的谷氨酸作用后GFAP和GS的表达, 并对GFAP和GS表达的变化分析总结。
结果 谷氨酸作用后,细胞的分裂生长较对照组明显加强,细胞活力增加,GFAP表达相比对照组明显增加(P<0.05)而GS的表达没有变化。
结论 高浓度谷氨酸的细胞外环境下,转运谷氨酸的GFAP表达明显增加,而代谢谷氨酸的GS表达不变。表明Müller细胞对谷氨酸由细胞外向细胞内的转运增多,而对谷氨酸的代谢是滞后的, 这种代谢滞后使谷氨酸在细胞体内蓄积破坏了正常的谷氨酸-谷氨酰胺循环从而引起谷氨酸代谢紊乱,并逐渐在Müller细胞外组织液中蓄积,进一步导致兴奋毒性作用,造成了神经细胞受损。 |