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miR-29b沉默胶原基因抑制青光眼滤过性手术后滤过道瘢痕形成的体外研究
作者:李宁  文章来源:中南大学湘雅二医院眼科  点击数344  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的 筛选人Tenon’s囊成纤维细胞(HTFs)经TGFβ1诱导前后miRNA(miR)的差异表达谱,确定特定miRNA沉默纤维化相关基因,为寻找特异、高效的抑制青光眼滤过性手术后滤过道瘢痕形成寻找新的方法。
方法 利用miRNA芯片分析静态和TGFβ1激活的HTFs miRNA表达谱,经实时定量PCR确定得到候选miRNA,即miR-29b。根据生物信息学方法,预测miR-29b靶向调控基因为一系列胶原基因。构建荧光素酶报告基因行体外鉴定。体外瞬时转染miR-29b mimic和inhibitor,运用实时定量PCR和Western Blot从基因和蛋白两方面分析靶向胶原基因的表达影响。LY294002(PI3K特异性抑制剂)作为阳性对照。
结果 TGFβ1诱导HTFs前后miRNA存在差异化表达。其中,38个miRNA表达上调,31个miRNA下调。在TGFβ1激活HTFs中,miR-29b表达下调,差异具有显著性。miR-29b靶向调控PI3K、SP1和COL1A1、COL3A1等胶原基因。过表达miR-29b,抑制PI3K、AKt、SP1、COL1A1和COL3A1的表达,差异具有统计学意义。作用效果和LY294002相似。
结论 miR-29b通过PI3K/AKt/SP1信号通路,调控HTFs的胶原产生。过表达miR-29b可以抑制胶原基因的表达,可以有效抑制青光眼滤过术后滤过道瘢痕形成。
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