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人表皮源性间充质干细胞样多能细胞向角膜上皮细胞分化的实验研究
作者:王丽丽  文章来源:中山大学中山眼科中心病理室  点击数286  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 角膜缘干细胞缺乏是角膜缘干细胞群缺失或功能障碍,导致严重的眼表异常。角膜缘干细胞移植是目前有效治疗LSCD的一种方式,但具有一定的局限性。自体成体干细胞(adult stem cells, ASCs)眼表移植避免了移植排斥反应,而且取材广泛,逐渐成为研究的重点。本实验旨在探讨人表皮源性间充质干细胞样多能细胞(Human Epidermis-derived Mesenchymal Stem Cell-like Pluripotent Cells, hEMSCPCs)向角膜上皮分化的可能性及合适的分化条件,为治疗眼表疾病提供新的理论基础和新的细胞来源。
方法 1.成脂诱导条件培养基和成骨诱导条件培养基分别诱导hEMSCPCs成脂肪细胞和成骨细胞分化。2.采取三种方式诱导hEMSCPCs向角膜上皮细胞分化,A组采取去上皮羊膜作为滋养层,角膜上皮培养基作为诱导培养基;B组采用Transwell板进行人角膜上皮细胞系(SDHCEC1)和hEMSCPCs两种细胞共培养,角膜上皮培养基作为诱导培养基;C组用培养过人原代角膜缘上皮细胞的epilife培养基作为诱导培养基。3.分别在第1、2、3天倒置显微镜下观察各组hEMSCPCs细胞形态变化;采取免疫荧光、流式细胞仪来检测各组CK3,P63蛋白表达的变化,Real-Time PCR检测各组CK3,P63基因表达的变化。
结果 1. 在成脂诱导条件培养基和成骨诱导条件培养基诱导下,hEMSCPCs胞浆内分别出现脂滴和钙沉积。2. 诱导hEMSCPCs向角膜上皮分化后,免疫荧光和流式细胞仪检测各组均有角膜上皮特异蛋白CK3的表达,各处理之间CK3表达差异有统计学意义,A组(31.37±4.77%)>C组(21.97±2.96%)>B组(8.17±3.07%)>对照组(0.10±0.04%),P<0.001。P63表达未增加。Real-Time PCR检测各组诱导后CK3基因表达各组之间及与对照组之间表达差异有统计学意义,P<0.001。
结论 1.hEMSCPCs具有具有可以分化为成骨细胞和成脂肪细胞的能力。2.hEMSCPCs具有向角膜上皮细胞分化的潜能。3.去上皮羊膜为hEMSCPCs向角膜上皮细胞分化提供了较合适的微环境。 

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