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UV照射对HLEC凋亡的诱导以及细胞周期的影响
作者:贾松柏  文章来源:中南大学湘雅二医院  点击数344  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 用不同剂量紫外线(Ultraviolet, UV)照射体外培养人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cell,HLEC),通过对HLEC凋亡、细胞周期的观察,探讨紫外线诱导HLEC凋亡的细胞及分子生物学机制。
方法 以实验室培养的HLEC细胞株为研究模型,采用同一紫外线光源(UVA照度为0.29mw/cm2,UVB照度为0.09 mw/cm2),对HLEC进行照射。 按UV照射时间将HLEC分为0min、 5min、10min、15min及30min组, UV照射后HLEC放回二氧化碳培养箱继续培养12小时后再进行各项检测。采用Hoechst 33342 染色、琼脂糖凝胶电泳对HLEC凋亡进行定性检测;AO-EB染色及Annexin-V+PI双染流式细胞计数对HLEC凋亡进行定量检测,并分析UV照射剂量与凋亡率间的关系。流式细胞术检测细胞周期的变化。
结果 Hoechst 33342 染色及AO-EB染色UV处理后各实验组HLEC均有凋亡特征性形态改变, 如细胞质浓缩,细胞核致密浓染或呈碎块状形成凋亡小体等。琼脂糖凝胶电泳法检测除5min组外其余各组都出现DNA ladder,上述三种方法定性证实UV可诱导HLEC凋亡。AO-EB染色法检测HLEC凋亡率在0min、5min、10min、15min、30min组分别为1.82±0.53%、13.15±2.32%、17.58±1.62%、31.16±3.03%、29.25±2.53%(F=146.10,P<0.05)。Annexin-V+PI双染流式细胞计数检测以上各组凋亡率分别为1.98±0.84%、11.90±3.21%、16.15±3.05%、33.93±3.74%、22.72±6.05% (F=34.16,P<0.05)。两种方法定性分析均表明随UV照射时间的延长凋亡率增加。 各实验组G2/M期细胞与0min组比较差异有显著性(P<0.05), 但各实验组间差别无显著性(P>0.05); 经单因素方差分析,S期细胞随UV照射时间延长逐渐减少(F=40.34,P<0.05)。
结论 UV照射可诱导HLEC凋亡及细胞周期阻滞,二者均与UV照射剂量呈正相关。

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