目的:转运蛋白影响底物类药物在眼部组织的吸收、分布和排泄。本课题首次全面研究了转运蛋白在人角膜、结膜、虹膜-睫状体、脉络膜-视网膜等组织中表达与分布。 方法:定量RT-PCR、免疫组化、Western Blot 分别从基因与蛋白水平检测转运蛋白的表达,同时检测HCEC和ARPE-19细胞系中的各转运蛋白的表达作为比较。 结果:Western Blot结果显示MRP1,3,6,7 及LRP在角膜组织内表达;MRP1,3,4,6,7、P-gp、BCRP及LRP在结膜组织内表达;MRP1-7、P-gp及LRP在虹膜睫状体组织内表达;MRP1-3,5-7、P-gp、BCRP及LRP在视网膜组织内表达;MRP1-3,7、P-gp、BCRP及LRP在HCEC细胞内表达;MRP7、P-gp、BCRP及LRP在ARPE-19细胞内表达。免疫组化检测结果表明在角膜上皮细胞层中,LRP、MRP1,6,7均具有较强的表达;结膜上皮细胞层中P-gp、LRP、MRP1,6,7均有强的表达;睫状体基质细胞胞浆中P-gp、MRP1,2有较强表达;视网膜全层细胞胞浆中P-gp、MRP1,2,6均有强的表达;MRP3,7和LRP有较弱表达。定量PCR结果表明各种转运体的表达量高低如下: MRP1:视网膜>虹膜睫状体>角膜>结膜;MRP2:视网膜>虹膜睫状体> 结膜>角膜; MRP3:结膜>角膜>视网膜>虹膜睫状体;MRP4:虹膜睫状体>结膜>视网膜>角膜;MRP5:视网膜>虹膜睫状体>角膜>结膜;MRP7:视网膜>角膜>结膜>虹膜睫状体;MDR1、BCRP:虹膜睫状体>视网膜>结膜>角膜;LRP:角膜>虹膜睫状体>结膜>视网膜。 结论:转运蛋白在眼组织内表达水平和组织定位差异很大,表现出很强的组织特异性,而HCEC和ARPE-19细胞系并不能很好地体现相应组织的转运体表达。 |