方法：构建pcDNA3-c-Kit Promoter-OPTN（E50K）质粒，显微注射将转基因片段导入C57小鼠基因组，PCR和DNA dot blot检测目的基因的整合，Western blotting及组织免疫荧光检测CREB蛋白磷酸化水平与OPTN和BDNF蛋白在小鼠视网膜表达情况，利用real-time PCR检测转基因小鼠视网膜BDNF的mRNA以及mir-9的表达水平，利用组织染色检测视网膜退变情况，荧光金逆行标记视网膜RGCs观察其存活情况，利用Tonopen检测小鼠眼压变化情况。体外建立真核表达载体pcDNA3.0-his-OPTN_WT与pcDNA3.0-his-OPTN_E50K并瞬时转染到RGC-5细胞，real-time PCR检测BDNF的mRNA以及mir-9的表达水平，Western blotting检测CREB蛋白磷酸化水平与OPTN及BDNF蛋白表达情况，FITC Annexin V-PI检测细胞凋亡情况。

结果：经PCR及DNA dot blot鉴定人突变体OPTN（E50K）基因完整整合入C57小鼠基因组，组织免疫荧光及Western blotting显示人OPTN（E50K）蛋白在转基因小鼠视网膜中过量表达。与野生小鼠相比，18月龄转基因小鼠视网膜厚度明显下降（P<0.05），视网膜RGCs数量明显减少（P<0.05），视网膜CREB磷酸化水平下降（P<0.05），BDNF mRNA水平和蛋白表达水平明显下降（P<0.05），mir-9转录水平也检测到明显下降，各月龄转基因小鼠眼压与野生小鼠相比无明显差异（P>0.05）。体外细胞模型上，与转染野生型OPTN基因相比，转染OPTN(E50K)突变基因的RGC-5细胞BDNF mRNA水平和蛋白水平显著下降（P<0.05），mir-9转录水平也检测到明显下降，CREB磷酸化水平下降（P<0.05），凋亡明显增多（P<0.05）。

结论：人突变体OPTN（E50K）转基因小鼠模型建立成功，该小鼠在生长发育过程中眼压保持正常范围，具有正常眼压型青光眼的视网膜变性特征。在转基因小鼠体内和体外细胞模型人突变体OPTN(E50K)均可以诱导视网膜神经节细胞的CREB磷酸化水平下降以及BDNF mRNA以及蛋白的表达下降，并且使RGCs凋亡数量相应增加，推测人突变体OPTN（E50K）可能通过影响miR-9的水平，进而调控REST-CREB-BDNF通路的表达，致使RGCs神经营养缺乏，从而导致RGCs凋亡，为OPTN基因突变导致POAG分子生物学机制提供了新的证据，进一步为青光眼的基因治疗提供了良好的研究基础，为临床治疗青光眼提供新的策略和治疗靶点，并对推进该疾病的研究具有重要意义。