目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对体外加压培养的大鼠视网膜神经节细胞（RGC-5）的保护作用。
方法 利用加压装置模拟青光眼性高眼压对RGC-5细胞造成损伤。通过MTT法筛选EGCG对体外加压培养的RGC-5的最佳用药浓度围,确定EGCG用药浓度。正常对照组RGC-5常规条件下培养；单纯加压组RGC-5在40mmHg压力下培养48小时；药物干预组RGC-5在给予40mmHg压力的同时给予0.1μm、0.5μm、1.0μm三种不同浓度的EGCG干预48小时。MTT法检测细胞活性、倒置相差荧光显微镜观察线粒体膜电位变化、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测解偶联蛋白-2（UCP-2）和超锰氧化物歧化酶(MnSOD)基因及蛋白表达量的变化。
结果 MTT检测结果显示:EGCG在浓度为0.08μm至2.5μm时可提高压力作用下细胞的细胞活性，而在0.1μm -1μm时作用最为显著。与单纯加压组细胞活性（67.53±2.12%）相比，0.1μm、0.5μm、1.0μmEGCG药物干预组细胞活性分别上升为90.14±2.45%（P<0.05）、86.36±2.33%（P<0.05）、85.25±1.92%（P<0.01）。倒置相差荧光显微镜观察细胞线粒体膜电位发现，正常细胞线粒体膜电位正常显黄色荧光，单纯加压组较正常细胞组及药物干预组细胞绿色荧光明显增强，线粒体膜电位明显升高。qRT-PCR结果显示：单纯加压组UCP-2、MnSOD基因表达量较正常细胞组明显降低，药物干预组较单纯加压组UCP-2、MnSOD基因相对表达量增高，单较正常细胞组均降低。Western blot结果显示：单纯加压组UCP-2、MnSOD蛋白表达量较正常细胞组明显降低，药物干预组较单纯加压组UCP-2、MnSOD蛋白表达量增高；差异均有统计学意义（P<0.05）。
结论 应用EGCG可以显著提高高压条件下RGC-5细胞的细胞活性，降低线粒体膜电位，提高细胞内UCP-2及MnSOD的表达水平，增强细胞抗氧化损伤能力，提示EGCG可以作为一种潜在的青光眼性视神经保护药物。 |
