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HIF1a.shRNA抑制眼部新生血管的离体研究
作者:王宏彬  文章来源:首都医科大学附属北京友谊医院  点击数812  更新时间:2012/9/13 11:58:00  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 探讨pSilence.HIF1a.shRNA在人宫颈癌HeLa细胞培养模型中对HIF1a及其下游调控基因VEGF的抑制效果,为进一步的基因治疗有效性提供依据。
方法  HeLa人宫颈癌细胞以5x104 /孔种植于12孔细胞培养盘中,当细胞长至50-70%时,利用Lipofectamine 2000做转染剂,转染pSilence.HIF1a.shRNA,培养20小时后,制造细胞缺氧模型,一天后收获细胞上清液和细胞,分别检测上清液中的VEGF 水平和HeLas细胞中的HIF1amRNA和蛋白含量。
结果 qPCRwestern结果表明,在培养的细胞中,正常氧的情况下,HIF1mRNA含量很低,在缺氧的情况下,HIF1amRNA及蛋白显著上升,HIF-1a.shRNA 转染后,可以特异有效地下调HIF1a蛋白和 RNA水平。与阴性对照相比 HIF-1a mRNA 水平减少 89 %Western blot结果表明,与未转染的阴性对照比较,HIF1a蛋白水平可以显著敲除。细胞免疫组织化学结果同样支持这一结果。同时可以显著下调细胞上清液中的VEGF 蛋白水平
结论 我们发现,在培养的人宫颈癌细胞中,HIF1a.shRNA 可以特异有效地敲除HIF1a mRNA 和蛋白表达,并减少其下游调控基因VEGF蛋白表达下降。

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