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人晶状体上皮细胞HLE B-3中细胞膜Ca2+-ATPase 同工异构体2 的表达
作者:杨晖 曾骏…  文章来源:中山大学中山眼科中心 510060  点击数1630  更新时间:2004/6/15  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的 检测人晶状体上皮细胞系B-3(Human lens epithelium B-3, HLE B-3)中,细胞膜Ca2+-ATPase(Plasma Membrane Calcium ATPase, PMCA)的同工异构体之一,PMCA2,的表达情况。 方法 细胞培养HLE B-3,当细胞培养达90%融合时,提取其总mRNA,用PMCA2特异性引物进行反向聚合酶链反应(RT-PCR), 以检测PMCA2在mRNA水平上的表达。 提取细胞膜蛋白,经 SDS-PAGE电泳以及蛋白免疫印记法(Western blot),用抗-PMCA2的特异抗体检测其在蛋白质水平上的表达。结果 RT-PCR 结果显示PMCA2特异性引物在HLE B-3 细胞扩增出唯一550bp 的片段。蛋白免疫印记法证实PMCA2的表达,分子量约为126 kDa。 结论 HLE B-3细胞中,在mRNA水平以及蛋白质水平均有PMCA2的表达。 并有可能在HLE B-3细胞的钙离子平衡调解中发挥重要作用。
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