| 目的：探索角膜基质接触诱导ES细胞定向分化的可能性。
方法：在去上皮的新西兰白兔角膜缘表层基质上培养ES-D3细胞，形成复层细胞后，一组继续体外诱导，另外一组移植到裸鼠皮下，进行体内诱导，最后进行形态学、免疫组织化学和蛋白质电泳检测。
结果：1.ES细胞在新鲜表层角膜缘表层基质上增殖缓慢，光镜下细胞形态单一，体积较正常ES细胞大，电子显微镜下细胞核已演变为细长形，而角膜基质非上皮面的ES-D3细胞仍保持其小细胞状态不变,但是,培养板上无角膜缘表层基质贴附的区域, 贴壁的ES细胞发生自由分化，细胞死亡和脱落,未死亡的贴壁细胞呈多态性,大部分表现神经样细胞的树突样外观。已发生分化细胞的P63和AE5染色阳性，蛋白质电泳有64K和48K蛋白质条带出现，而未分化的ES细胞没有。2.在气-液界面上培养10天, 形成连续细胞复层，移植到裸鼠皮下后2周,没有畸胎瘤出现，而是形成4~5层细胞的复层结构,电子显微镜下，可见微绒毛。免疫组织化学检测显示：AE5阳性表达。
结论：表层角膜缘表层基质具有诱导ES细胞定向分化的潜能。
本研究受国家重点基础研究发展规划 (973)项目(G1999054309)、教育部博士点基金(20030558074)和广东省自然科学基金重点项目(2003A3020401)资助。 |
