| 目的 体外培养扩增角膜缘干细胞，为眼表重建和构建组织工程化角膜准备种子细胞。方法 人、猴、兔角膜缘组织块接种在塑料培养瓶底及羊膜上，在培养液中添加慢循环细胞的标记溴脱氧尿苷（bromodeoxyuridine, BrdU），倒置相差显微镜观察细胞的形态；免疫组织化学染色及western blot检测所获得细胞BrdU及CK3、PCNA、P63的表达，接种角膜缘组织块的羊膜培养10-15天后行冰冻切片，HE染色和免疫组化鉴定 结果 人、猴、兔的角膜缘组织块上2天左右即有细胞长出，人的角膜缘组织块上长出的细胞能够消化5～7次而且保持上皮形态；猴的角膜缘组织块上长出的细胞能够消化2～4次，兔的能够消化7～9次。免疫组化染色显示：BrdU、AE5(抗CK3)、P63及PCNA表达阳性，消化收集的细胞P63阳性率在85％～35％之间。western blot检测到PCNA、P63的表达，角膜缘组织块接种在羊膜上可以形成复层上皮结构。结论 组织块培养法能够实现人、猴、兔角膜缘上皮细胞的培养，而且扩增的细胞中具有慢细胞周期的干细胞。猴的角膜缘干细胞生物学特性与人、兔的差别较大，其生物学特性尚须进一步研究。
本课题受下列基金资助：国家重点基础研究发展规划项目973子课题（G1999054309-6）、国家高技术研究发展计划（863计划）（2003AA205050）、广东省科技计划项目:组织工程重大专项（A302020101）、广东省科技计划项目（2003A3020401）和教育部博士点基金（20030558074）。 |
