目的 将含绿色荧光蛋白与胞嘧啶脱氨酶基因(自杀基因)的真核表达载体(pEGFP-CD)转染体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞(HTFs),探讨自杀基因/前药系统(CD/5-FC)调控青光眼滤过手术后纤维瘢痕化的可行性。方法 用HindIII与EcoRI双酶切含CD基因的pUC19-CD与真核表达载体pEGFP-C1,从而构建含绿色荧光蛋白与CD融合基因的表达载体pEGFP-CD,用LipofectamineTM2000转染体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞,在荧光显微镜下观察转染情况并照相,RT-PCR检测CD基因的表达。结果 酶切鉴定结果显示成功构建了真核表达载体pEGFP-CD,荧光显微镜下见具有强绿色荧光的成纤维细胞,转染效率为25%,RT-PCR检测到CD片段。结论 CD基因成功转染到HTFs并得到了表达,可用于后续的药物杀伤试验及活体实验。
本课题受国家自然科学基金30171001,39770789资助 |