| 目的 探讨蛋白激酶Ｃα（PKCα）对小鼠胚胎干细胞(ESCs)定向诱导分化中发育基因(pax-6、slit-2、netrin-1)表达的影响。 方法 ES-BALB/c细胞株用无白血病抑制因子(mLIF)的ESCs培养液培养4d，形成胚胎体(EBs)，再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100 mm的培养皿，经5×10-7 mol/L视黄酸 （RA）诱导后，用神经细胞特异性抗原NSE和NF-200来鉴定分化细胞的类型，在诱导后第1、3、5、7及14d用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定细胞的PKCα和发育基因的mRNA表达情况 ,并观察了PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D-鞘氨醇对它们表达的影响。 结果 免疫组化发现在诱导后第3 d大多数细胞NSE和NF-200染色阳性，RT-PCR 证实诱导后第1 d PKCα、pax-6和netrin-1的mRNA表达急剧下降，第3～7 d逐渐升高，至第14 d恢复至正常水平，而slit-2在诱导前后均无明显表达。PMA可使PKCα、 pax-6、netrin-1 的mRNA水平在诱导后细胞中的表达明显增强,而D-鞘氨醇的作用相反, 使它们的表达显著降低，而对slit-2无明显影响。结论 发育基因pax-6和netrin-1在ESCs定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用，可能是通过PKCα信号通路起作用。
国家重点基础研究发展规划项目（ 973）子项目（G1999054301）、国家自然科学基金（30171001,30200306）、广东省重点科技攻关项目（A302020101）、广东省自然科学基金（990093）、广东省教育厅重点实验室建设基金。 |
