| 目的 利用Cre/LoxP系统构建TIGR、OPTN基因时空特异性打靶载体； 方法 在通用型时空特异性打靶载体pflox的基础之上，利用分子克隆技术，将TIGR、OPTN基因组序列C端功能域置于两个方向相同的LoxP序列之间，将其5’端和3’端序列作为5’同源长臂和3’同源短臂,将neo、tk正负筛选基因置于内含子中，从而避免筛选基因干扰TIGR、OPTN基因转录后拼接；结果 经限制性内切酶、PCR、测序鉴定，确定构建了5’同源长臂为3.6kb，3’同源短臂为2kb，第三外显子位于两个loxP序列之间的TIGR基因时空特异性打靶载体， 以及5’同源长臂为2.5kb，3’同源短臂为2.7kb，第四、五外显子位于两个loxP序列之间的OPTN基因时空特异性打靶载体。结论 利用Cre/LoxP系统成功构建了TIGR、OPTN基因时空特异性打靶载体，为进一步构建TIGR、OPTN基因时空特异性基因敲除小鼠奠定基础。
本课题获国家自然科学基金（30300380）、广东省自然科学基金重点项目（36649）、广东省教委基金资助 |
