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克隆化培养角膜缘干细胞前后表型分析
作者:潘赞 周翔…  文章来源:温州医学院附属眼视光医院 325027  点击数1414  更新时间:2004/6/15  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的:通过比较克隆法培养前后及克隆法与常规组织块法培养角膜缘干细胞表型变化,探讨利用克隆法培养角膜缘干细胞的生物学特点。 方法:取2mm2人角膜缘组织,同时进行克隆法和常规组织块法培养角膜缘干细胞。应用角蛋白特异性单抗AE1/AE3, AE5, anti-CK14, anti-CK19,PCNA 分别对两种培养法获得的第1代和第5代细胞进行免疫染色,光镜观察、分析染色结果。 结果:在第1代,克隆法和组织块培养法培养的角膜缘干细胞形态和免疫染色性质一致,大多数角膜缘干细胞呈大小一致,排列紧密的小圆形结构,表达的表型说明干细胞处于低分化高增殖水平。但是经过不同培养模式后,第5代角膜缘干细胞的形态和表型出现差异:克隆法培养的大部分细胞形态与染色性质与原代维持一致;而越来越多的组织块法培养的细胞出现体积增大,形态变细长,生长放缓,表达的表型也提示细胞出现分化,增殖力下降。 结论:角膜缘干细胞通过克隆法培养后能保持低分化状态和较强的增殖潜能,克隆法较组织块培养法在体外更适合维持角膜缘干细胞生物学特性。
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