目的 本课题以大鼠视网膜Müller细胞作为研究对象,从离体细胞研究层面,研究中药密蒙花方对高糖状态下视网膜Müller细胞增殖的影响,阐明其作用机理,为密蒙花方防治早期糖尿病视网膜病变提供实验依据。 方法 采用大鼠视网膜Müller细胞进行体外培养,在30mmol/L葡萄糖下培养,模拟高糖环境,同时给予20%含密蒙花方血清(以下均称含药血清)干预12h、24h、36h,进行以下研究: 1.采用CCK-8法观察密蒙花方对高糖状态下大鼠视网膜Müller细胞的增殖影响。2.采用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双色染色法观察密蒙花方对高糖状态下视网膜Müller细胞凋亡的影响。 结果 1.CCK-8法检测结果显示:①高糖组较正常组吸光度值增高,具有统计意义(p<0.05)。10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L浓度组吸光值与正常组相比,明显提高(p<0.05),且呈浓度依赖性。40mmol/L、50mmol/L、60mmol/L浓度组吸光值与30mmol/L组相比明显降低。(p<0.05)②含药血清干预12h时,20%、40%浓度组吸光值与高糖组相比,明显降低(p<0.05)。含药血清干预24h时,10%、20%、40%浓度组吸光值与高糖组相比,明显降低(p<0.05);含药血清干预36h时,5%、10%、20%、40%浓度组吸光值与高糖组相比,明显降低,差异显著p<0.05。空白血清组与高糖组比较,吸光值差异不显著(P>0.05)。 2.流式细胞检测结果显示:高糖组较正常组细胞早期凋亡比例减少 ,活细胞比例增高,差异具有统计意义(p<0.01);各含药血清组与高糖组相比,细胞早期凋亡比例增高,活细胞比例减少(p<0.05)。 结论 1.密蒙花方可以抑制高糖状态下视网膜Müller细胞的增殖。2.密蒙花方通过诱导高糖状态下视网膜Müller细胞的早期凋亡,抑制细胞反应性增生。 |