| 目的：应用培养的人眼脉络膜血管内皮细胞体外模型，探讨内皮抑素抑制人眼脉络膜微血管内皮细胞增殖的作用；方法：1. 采用胰酶、胶原酶对人眼脉络膜组织块进行两步消化，应用免疫磁珠CD31Dynabeads对消化后的细胞混合悬液分选纯化，合理地使用适宜于血管内皮细胞生长的培养基和培养器皿，培养人眼脉络膜血管内皮细胞；形态学观察、透射电子显微镜观察、内皮细胞特异标志FⅧ因子、CD31、CD34的免疫组化染色观察的方法对培养的人眼脉络膜血管内皮细胞进行了鉴定；2.应用MTT比色法观察24hr、48hr、72hr浓度为：10000、5000、2500、1250 、625 、313 、157ng/ml的Endostatin对无血清组、无血清+VEGF组人眼脉络膜血管内皮细胞增殖的抑制作用，实验结果以A值及细胞增殖抑制率I＝（A对照-A实验）/A对照表示，A值采用方差分析和组间t检验，数据处理由统计学分析软件SPSS11.5完成，P<0.05代表差异有统计学意义；结果：24小时无血清组P>0.05，无血清＋VEGf组当ES浓度≥313ng/ml时，与对照组的A值比较，经统计学分析，P<0.05；48小时，无血清组当ES浓度≥1250ng/ml时，与对照组比较，A值经方差分析，P<0.05；无血清＋VEGF组ES浓度≥157ng/ml，A值较对照组的经统计学分析，P<0.05，抑制作用随ES浓度增加而增强，当ES浓度为10000ng/ml时，抑制率高达33.95%；72小时无血清组当ES浓度≥2500ng/ml，与对照组比较，A值经方差分析，P<0.05； 无血清＋VEGF组只有ES浓度为10000ng/ml 的A值与对照组的经统计学分析，P<0.05；结论：ES可显著抑制VEGF诱导的人眼脉络膜血管内皮细胞增殖作用；为抑制脉络膜新生血管提供了新的治疗途径，但一次给予内皮抑素作用维持时间不超过72小时，如何维持作用浓度和时间仍需进一步的研究。 |
