目的 应用流式细胞分析（FCM）技术检测SD大鼠角膜内皮细胞CD80分子表达情况，同时应用原子力显微镜（AFM）技术观测该化合物对角膜内皮细胞超微结构的影响
方法 采用密度梯度离心分离法获取SD大鼠肠系膜静脉血的单个核细胞（MNCs），与原代培养的角膜上皮细胞共刺激培养3d，加入20000U/L IL-2，500000U/L IFN-γ细胞因子。实验分为三组：A组=MNCs+角膜内皮细胞+小分子化合物J2；B组=MNCs+角膜内皮细胞；C组=角膜内皮细胞（空白对照组）。将各组处理好的细胞用流式细胞仪检测CD80分子表达的荧光强度。应用AFM观测三组细胞膜表面超微结构的改变，以及小分子化合物J2对细胞膜的影响。观测指标为平均粗糙度（Ra）、均方根粗糙度（Rq）、平均低谷高度（Rvm）、波峰至波谷的粗糙度（Rt）。
结果 经FCM检测，A组角膜内皮细胞CD80分子荧光指数为2.132±0.173，B组为4.023±0.164，C组为0.985±0.118，经单因素方差分析，具有统计学方面差异（F=4989.799，P< 0.00）。AFM观察角膜上皮细胞，呈多边形，胞核的大小在17.28μm×20.43μm左右，整个细胞的长度在52.45μm左右，高度为356nm。细胞的表面总体较光滑，其表面超微结构显示颗粒状突起。在MNCs以及细胞因子IL-2和IFN-γ共同刺激作用下，B组的角膜内皮细胞长度增加，细胞呈现密集状态，胞体表面凹凸不平的粗糙程度明显增加，出现许多颗粒状突起，还可观察到有细微的树枝状突起分布；而A组细胞在小分子化合物J2作用下，这些表面凹凸不平的现象有所降低，但仍然与C组静止未受活化的角膜上皮细胞有所区别。经单因素方差分析比较三组Ra、Rq、Rvm、Rt值，F值分别为：225.317，351.867，37.357，3877.524。认为三组之间存在统计学方面差异。
结论 小分子化合物J2可以抑制角膜内皮细胞CD80分子的表达，应用AFM技术可以观测到角膜内皮细胞膜表面超微结构的变化，小分子化合物J2可以减少角膜内皮细胞凹凸不平的膜表面超微结构，同时使观测AFM的指标Ra、Rq、Rvm、Rt值降低。原子力显微镜技术是一种观测细胞膜表面超微结构的良好工具。 |
