目的  研究人羊膜上皮细胞体外培养和扩增，及其向角膜上皮细胞诱导分化的可能性。

方法  取足月顺产人胎盘，钝性剥离羊膜，PBS反复冲洗，经胰蛋白酶消化后，接种于培养瓶中，应用DMEM/F12培养基（10%胎牛血清，人重组表皮生长因子10ng/ml，青链霉素50IU/ml）进行原代和传代培养，并通过免疫组化方法测定细胞角蛋白3、18、19的表达情况，对人羊膜上皮细胞进行鉴定。取新西兰大白兔角膜，应用全角膜组织块培养法培养角膜上细胞，取原代角膜上皮细胞和第2、3代人羊膜上皮细胞共同接种于transwell小室内进行培养7天。

结果  人羊膜上皮细胞在原代培养2 h 后开始贴壁生长，3d后贴壁紧密，难以消化下来。细胞呈多角形、不规则形，排列呈铺路石样表现。体外可连续传4～5代，6代后部分细胞体积开始变大，部分呈纤维细胞样改变。细胞角蛋白3、18、19多克隆抗体染色阳性。流式细胞仪检测CK3、CK18、CK19表达率分别为41.84±3%, 46.51±2%, 和33.41±3%。兔角膜上皮细胞在培养的第3天时开始爬出，呈多角形，排列均匀。经诱导培养后的人羊膜上皮细胞呈多角形、扁平状，细胞体积增大。流式细胞学检测细胞角蛋白3表达率为75.70±0.3%，经统计学处理，有统计学意义。扫描电镜显示诱导前人羊膜上皮细胞大小形态不一，有长梭形、多角形、扁圆形等不同形态。直径约为60μm，细胞较丰满，表面可见大量微绒毛，细胞可见长的突起或伪足，细胞之间连接多。诱导后羊膜上皮细胞大小、形态较均一，呈扁平、多角形。细胞直径约为100μm，细胞之间联系少，细胞薄、扁平状，胞质少，细胞质内呈网状。细胞表面微绒毛不明显，未见伪足。

结论  人羊膜上皮细胞在体外可成功进行原代、传代培养，并维持增殖能力。人羊膜上皮细胞可被角膜上皮细胞诱导分化为类角膜上皮细胞。