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天然免疫在调控角膜真菌感染中的作用
作者:王俊  文章来源:山东大学齐鲁医院  点击数193  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 研究TLR2配体酵母聚糖 (Zym)TLR4配体脂多糖(LPS预处理永生化人角膜细胞和大鼠角膜在调控角膜真菌感染中的作用。
方法 体外:用10ng/ml Zym10ng/ml LPS联合预处理人角膜基质细胞,于不同时间点用106 CFU/ml烟曲霉菌刺激细胞,收细胞及上清用RT-PCRELISA检测炎性因子(IL-6)表达。体内:实验组用小剂量Zym预处理大鼠,角膜基质注射法建立烟曲霉菌角膜炎模型。对照组用PBS预处理角膜再接种烟曲霉菌于接种菌后不同时间点(1357d)裂隙灯观察大鼠角膜形态并给予临床评分,对比各组角膜感染程度和临床转归。不同时间点处死大鼠取角膜做组织病理学检查HE染色、PAS染色及真菌培养行烟曲霉菌菌落计数;髓过氧化物MPO)活性分析检测中性粒细胞浸润;ELISA检测角膜组织炎性因子IL-1β,6的表达;RT-PCR、免疫组化检测角膜组织TLR2、抗菌肽rBD-2的表达。
结果 体外:10ng/ml Zym10ng/ml LPS联合预刺激较二者单独刺激更有效抑制IL-6分泌。体内:裂隙灯观察可见对照组有典型真菌角膜溃疡形成,预处理组角膜烟曲霉菌感染炎症反应较轻,未形成明显溃疡;组织病理学检查HE染色可见对照组角膜水肿,基质大量炎性细胞浸润,主要为多形核白细胞,预处理组角膜炎细胞浸润较轻,排列较规则;接种菌后第5PAS染色显示,对照组角膜基质仍有大量红色的真菌菌丝和孢子,预处理组明显减少;接种菌后第135天两组真菌负荷量有明显差异,预处理组真菌负荷明显减少;在菌液接种后第35天,对照组髓过氧化物活性与第1天相比明显提高,第5天活力最强,第7天逐渐减弱,预处理组髓过氧化物活性低于对照组,中性粒细胞浸润减轻;ELISA检测显示预处理组IL-1β,6表达较对照组明显降低;RT-PCR、免疫组化结果显示预处理组TLR2表达较对照组均降低,预处理组rBD2表达较对照组增高,第5天两组rBD2表达均开始下降。
结论 ZymLPS联合预刺激可以更有效地减少炎性因子的分泌。Zym预处理可诱导大鼠角膜细胞再编程,减轻角膜真菌感染,并显著减少中性粒细胞浸润,最关键能诱导抗菌肽表达增多,提高机体自身杀菌天然免疫防御力。

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