目的 通过观察大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)形态结构,对比Brn-3a与Thy-1.1的表达特点及计数差异,以便了解其分布部位和规律,探寻Brn-3a是否为一种可靠的内源性标记物,标记并计数RGCs。 方法 20只SD大鼠,随机选取大鼠一眼为Thy-1.1组,同一大鼠另一眼作为Brn-3a组, 过量麻醉处死,行3点钟位缝线标记,摘除眼球,浸泡于4%多聚甲醛的固定液中。48 h后脱水、透明、石蜡包埋,于视乳头颞侧旁开1mm,做4μm切片,做视网膜石蜡切片,常规苏木素-伊红染色镜下观察RGCs的形态,运用免疫组织化学法检测Brn-3a与Thy-1.1的表达情况,每只眼球取1张切片,以视网膜后极部中点为起点,至近角膜缘视网膜止点处,将视网膜分为三等份,即中央区、中间区及周边区,每个区域视网膜随机取5个高倍视野,以分别计算Thy-1.1、Brn-3a阳性的细胞计数均数为该区域阳性细胞数/高倍视野。 结果 光镜下正常大鼠的视网膜从内向外依次为神经节细胞层(GCL)、内核层(INL)、感光细胞层(ONL)。神经节细胞层的细胞呈单层排列,较为整齐,胞核清楚数目相对较少。两种标记物染色都仅仅存在于视网膜的神经节细胞层,但在大鼠RGCs中分布呈明显差异:Brn-3a主要在胞核中着色,Thy-1.1主要在胞浆中着色; RGCs计数, 中央区Thy-1.1组和Brn-3a组分别是29.75 2.02(个/高倍视野)和29.46
1.25(个/高倍视野),二组比较差异无显著性 (P>0.05),中间区Thy-1.1组和Brn-3a组分别是24.73
1.11(个/高倍视野)和24.43
1.66(个/高倍视野),二组比较差异无显著性 (P>0.05),周边区Thy-1.1组和Brn-3a组分别是21.79
1.25(个/高倍视野)和21.84
1.37(个/高倍视野),二组比较差异无显著性 (P>0.05)。而Thy-1.1组和Brn-3a组中央区、中间区和周边区两两比较差异均有显著性(P <0.05)。 结论 在大鼠视网膜中Brn-3a+细胞仅仅存在于视网膜的神经节细胞层,主要在胞核中着色。Brn-3a可能作为RGCs的一种可靠地内源性标记物,标记并计数RGCs。
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