目的：探讨含活细胞的羊膜基质对角膜上皮干细胞增殖与分化的影响。

方法：新鲜羊膜组织经过DispaseII 37℃短暂消化后刮除上皮细胞，固定于培养环上，一部分羊膜于-80℃反复冻融至少三次使基质细胞死亡作为对照组(D-dAM)，另外一部分羊膜未作任何处理放入SHEM培养基中为实验组(L-dAM)。将兔角膜缘上皮细胞片置于去上皮羊膜基质上培养7天。一部分组织块在培养前行BrdU标记，并示踪培养7天。收集扩增的上皮细胞以3T3细胞为滋养层进行克隆培养。在羊膜表面扩增的细胞分别行K12，K14，p63, Ki67的铺片和切片染色，以及IV型胶原、VII型胶原的切片免疫荧光染色。同时，收集上皮细胞，用蛋白印迹法检测K12， K14, p63, Ki67的表达。在不用任何消化处理情况下，用刮刀刮取L-dAM和D-dAM上扩增的上皮片，以备移植。
结果：在L-dAM上培养的上皮细胞排列更紧密，形态更小且均一，其克隆形成率明显高于在D-dAM上培养的角膜上皮细胞。示踪7天的BrdU标记保留细胞在L-dAM组明显比D-dAM多。免疫荧光染色及Western blot均显示L-dAM组的p63和Ki67表达明显比D-dAM多；K12在L-dAM组主要在浅层上皮细胞表达，基底层不表达，D-dAM组则全层表达K12，蛋白印迹法结果显示D-dAM组K12表达较多；蛋白印迹法显示K14在L-dAM组比D-dAM组稍多。培养7天后，两组上皮细胞都有IV型胶原的表达。在L-dAM上培养的上皮扩增后较易分离成完整的上皮片，可供移植，而D-dAM组的上皮不能获得完整的细胞片。

结论：含有活基质细胞的羊膜促进角膜缘干细胞体外扩增及其干细胞特性的维持，羊膜基质细胞在角膜上皮组织工程中可能发挥微环境细胞的作用。