目的 本研究利用角膜组织不同细胞和组织的光学特性，采用双光子荧光成像技术和二次谐波成像技术，对真菌性角膜炎小鼠角膜进行了活体体内、非侵入、立体形态学观察，为深入了解真菌性角膜炎的病理变化打下基础。
方法 主要仪器有德国Zeiss公司的LSM 780 NLO双光子激光扫描显微镜，美国相干公司的飞秒脉冲激光器。显微镜设置为：物镜为共聚焦专用20X浸入式水镜（NA 1.0）、3个反射非扫描检测器（Non Descanned Detection，NDD）设置分别为：R1（LP 555；BP 565-610）、R2（mirror；BP 380-430）、R3（mirror；BP 500-550），飞秒激光波长为800nm。C57BL/6N正常对照小鼠和真菌接种后24小鼠分别麻醉、固定后，暴露眼球，采用上述设置进行扫描，获取图像资料，利用Zeiss Zen 2010图像分析软件进行处理、分析。
结果 1）正常小鼠通过瞳孔，可以检测到角膜、房水和晶体组织，得到了这些部位的组织结构和细胞形态学的立体资料。2）可以清楚地检测到真菌、角膜上皮细胞、角膜基质细胞、角膜基质内的胶原结构，上皮下神经和血管影像。3）真菌周围，角膜固有细胞和胶原组织被破坏，胶原结构紊乱，炎症细胞包围，真菌周围组织呈现鞘样、隧道样结构；4）创伤部位有角膜上皮细胞填充的填充现象，真菌周围有角膜基质的激惹现象。
结论 通过对真菌性角膜炎小鼠角膜进行活体体内形态观察，可以清晰显示真菌性角膜炎病理状态下真菌、角膜固有细胞、胶原以及炎症细胞相互作用的立体图像，该方法是一种新的、活体体内、非创伤成像方法，对动态研究眼前节的病理以及病理变化提供了一些有意义的资料。 |
