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吡非尼酮抑制晶状体上皮细胞增殖的作用和机制研究
作者:杨扬帆  文章来源:中山大学中山眼科中心  点击数224  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 探讨吡非尼酮(PFD)体外抑制人晶状体上皮细胞(HLECs)增殖、迁移和胶原分泌的作用和机制,为PFD应用于防治后发性白内障提供科学依据。
方法 传代培养永生化HLECSSRA01/04),MTT法确定PFD的起始作用浓度、最适作用浓度以及最适作用时间;划痕法检测PFD作用下HLECs迁移能力的变化;台盼蓝法检测PFDHLECs是否有细胞毒性;应用Realtime RT-PCR法、免疫荧光法、免疫印迹法、明胶酶谱法检测PFD作用后TGFβs及下游SMAD通路的基因和蛋白表达的变化以及HLECS细胞外基质和分泌MMPs的变化。
结果 PFD抑制HLECs增殖的起始作用浓度为0.25 mg/ml,最适作用浓度为0.5mg/ml,最适作用时间为24hr;②PFD显著抑制HLECs迁移能力且呈浓度依赖性;③PFD01mg/ml)对HLECs无毒性作用;④Realtime RT-PCR检测PFD作用24hr后,TGFβ1、β2、β3及其下游因子SMAD34 mRNA表达均减少;⑤免疫印迹法提示PFD作用24hr后,TGFβ23蛋白、SMAD34、纤维连接蛋白等蛋白表达均受到抑制;⑥明胶酶谱法检测PFD作用后HLECs分泌MMP2和MMP9均减少
结论 PFD对体外培养HLECs的增殖、迁移和胶原分泌有明显抑制作用且呈浓度依赖关系,与细胞毒性无关,其起始作用浓度和最适作用浓度分别为0.25 mg/ml0.5mg/ml,最适作用时间为24hrPFD抑制体外培养HLECs增殖的机制可能是:通过抑制HLECsTGFβs基因和蛋白的表达,从而抑制TGFβs下游通路(SMADs通路);这些生长因子表达的减少可能是体外HLECs增殖和迁移能力受抑制的原因。

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