目的 研究生物型硬脑膜补片(脑膜建)用于兔眼结膜创口修补的可行性及有效性,观察结膜创口的愈合情况以及组织学变化特征。
方法 30只新西兰白兔随机分为3组,脑膜建组(10只)、羊膜组(10只)和对照组(10只)。利用环钻于兔眼颞上方球结膜制作8mm标准全层球结膜创口,建立兔眼球结膜缺损模型。各实验动物按分组要求行结膜重建手术,对照组结膜创口不修补任何材料,让创口自行愈合。术后观察创口周围结膜充血程度、创口上皮化时间以及并发症发生情况。裂隙灯检查并摄影记录。每组实验动物分别于术后2周(n=4)、4周(n=4)和8周(n=2)取材。HE 染色观察手术区域组织形态特征;过碘酸-Schiff染色观察新生上皮内是否存在杯状细胞;Masson三色染色观察胶原纤维沉积及排列形态;免疫荧光法检测结膜上皮细胞标志物CK4确认重建后上皮细胞来源于结膜上皮,检测杯状细胞粘液特异性标志物MUC-5AC观察上皮内是否存在杯状细胞。
结果 脑膜建组与羊膜组术后创口周围结膜充血程度无明显统计学差异。脑膜建组移植术后均未出现超急性免疫排斥反应。其中4只白兔(40%)免疫反应轻微,组织学上主要表现为早期成纤维样细胞聚集,后期胶原纤维沉积;术后4周仍有部分创口未完全结膜上皮化,上皮细胞内存在杯状细胞。5只白兔(50%)脑膜建在术后不同时间出现溶解,组织学上表现为脑膜建周围大量多形核细胞浸润,形成坏死性炎症。1只白兔脑膜建于术后6周自动脱落,创口瘢痕化愈合。羊膜组创口于术后2周完全结膜上皮化,上皮内散在杯状细胞。植床较多炎症细胞浸润,但大体观察未见免疫排斥反应发生。后期创口修复重建后瘢痕化不明显。对照组术后2周仍有2只白兔(20%)创口未完全结膜上皮化,术后炎症反应不明显,创口处形成轻度瘢痕。
结论 脑膜建作为基质支架可供结膜上皮细胞爬行生长,不影响杯状细胞的分化。脑膜建在采取有效措施防止溶解的情况下,可作为结膜缺损修补的一种潜在材料。但需要对该材料进行进一步的改进,以吻合组织工程结膜重建对支架材料的要求。 |