目的 观察FTY720眼用凝胶及环孢霉素(CsA)滴眼液抑制小鼠异基因角膜移植排斥的效果,并对抑制机制进行探索。 方法 总计75只BALB/c小鼠接受C57BL/6小鼠角膜行穿透性角膜移植手术。术后分别给予0.1%、0.3%或0.5% FTY720 眼用凝胶以及1% CsA滴眼液,空白对照组不给予任何药物。观察术后角膜植片排斥反应发生情况,记录生存曲线。流式细胞技术检测外周血、脾及颈部淋巴结中 CD4+ T 细胞及CD4+CD25+Foxp3+ (Treg) 调节性T细胞分布情况。Real-time PCR检测植片中的相应细胞因子mRNA表达。对角膜植片进行HE染色,并进行CD4 + T细胞以及IL-2、Il-10、IFN-γ、TGF-β1进行细胞免疫组化染色检查。 结果 在植片平均生存时间(MST)方面,可以观察到0.5%FTY720组(24.11±1.58天)以及1%CsA组(25.00±1.91天)均较空白对照组(13.44±0.48天)明显延长(P<0.01)。0.5% FTY720能显著增加颈部淋巴结中CD4+T细胞以及Treg细胞的比例(P<0.05和P<0.01)。在0.5%FTY720组,角膜植片中TGF-β1mRNA 表达明显增高(p<0.05),而1%CsA组中IL-2和IFN-γmRNA表达 则明显降低的(p<0.01和p<0.05)。全部细胞因子的免疫组化结果与RNA表达结果一致。0.5%FTY720以及1%CsA点眼后均能明显减少CD4+T细胞在角膜植片中的浸润。 结论 0.5%FTY720眼用凝胶以及1% CsA眼液均延长小鼠异基因角膜移植术后排斥反应的发生。与1%CsA眼液不同,0.5%FTY720眼用凝胶能够增加颈部淋巴结中的CD4+T细胞、Treg细胞的比率。此外0.5%FTY720能够显著增加植片中TGF-β1表达,减少植片中CD4+ T细胞的浸润;1%CsA眼液则减少了增加植片中的IL-2和IFN-γ表达。 |