目的 建立一种角膜灌流器官培养保存方法，藉以优化传统器官培养保存中角膜的生存环境，并通过研究灌流培养技术在器官培养角膜保存中对角膜内皮细胞活性的影响，评价该技术在角膜器官培养保存中应用的效果。
方法 利用化学玻璃制作一种带有底座和角膜固定结构的角膜培养瓶，并利用精密蠕动泵与自制的角膜培养瓶相组合构建一种角膜灌流培养保存装置，可以把角膜片良好的固定于该装置中，并通过蠕动泵向装置内连续恒定的补充培养液。利用新研制的角膜灌流培养保存装置以及传统的密闭和定期换液保存3种方式进行兔角膜的器官培养保存实验，在保存后1～4周的不同时间点，对三组保存前后的培养液进行PH值、葡萄糖及乳酸含量检测，并观察污染情况；同时对角膜进行内皮细胞活性染色、酶组织化学染色及电镜检查。
结果 该灌流培养保存装置能够提供相对稳定的培养环境，有效地防止污染．经灌流培养保存后的角膜拥有更高的内皮细胞密度、更好的组织学形态以及细胞超微结构。
结论 灌流培养可以优化器官培养中角膜的生存环境，更接近体内的生理环境，保证了角膜在体外更长时间的保存。本研究设计的角膜灌流培养装置具有可行性，有望改善现有的角膜培养保存模式。 |
