目的 检测不同浓度藏红花素对视网膜Müller细胞（RMC）增生和活性情况，观察藏红花素对缺氧条件下环境下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。
方法 改良Reichenbach等方法原代培养Müller细胞，并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC。RMC培养基中加入终浓度10μmol/L、50μmol/L和100μmol/L 藏红花素，于1~7d计数细胞，于24h和48h台盼蓝染色测定细胞活性，对照组RMC培养基中未加入藏红花素。培养液中加入终浓度为200 μmol/L的 CoCl2建立化学缺氧模型。实验分4组：缺氧组（H）、藏红花素处理组（C）、缺氧+ 藏红花素处理组（HC）和正常对照组（NC），其中C和HC组培养液中加入10μmol/L藏红花素。处理24h，台盼蓝染色检测细胞活性，采用Western blot法半定量检测GFAP的表达。
结果 含10μmol/L和50μmol/L crocin的培养液中，细胞生长无抑制；100μmol/L crocin的培养液中细胞增生受到抑制，培养24h和48h RMC活性分别为68%±7%、59%±9%，与对照组相比，明显降低（t24h=3.723，P＜0.05；t48h=4.103，P＜0.05）。在缺氧条件下，正常细胞和10 μmol/L crocin的培养液中细胞活性受到明显抑制，crocin可减轻缺氧环境对细胞活性抑制作用。在缺氧条件下，GFAP表达明显升高(t=2.945，P＜0.05)；crocin可部分抑制GFAP高表达(t=3.362，P＜0.05)。
结论 缺氧能诱导体外培养视网膜Müller细胞死亡，适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Müller细胞死亡。 |
