目的 探讨钙通道阻滞剂尼莫地平（NP）对氧化应激（OS）诱导视网膜神经节细胞（RGCs）凋亡的影响，为研究保护视功能的新药和发展新的治疗方法提供理论和实验依据。
方法 以过氧化氢（H2O2）处理来模拟体内OS产生活性氧自由基攻击RGCs。通过四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度的H2O2作用于RGCs 24h、48h后细胞生长抑制率以及不同浓度的NP作用于同一浓度H2O2处理的RGCs 24、48h后细胞凋亡抑制率。通过逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测在NP作用和/或单独H2O2处理后p53、bax、Caspase-9基因在RGCs中表达量的变化；通过吖啶橙（AO）/溴化乙锭（EB）染色法观察在NP作用和/或单独H2O2处理后RGCs的形态学改变。
结果 MTT比色法结果显示H2O2处理后的RGCs的生长抑制率在一定范围内随H2O2浓度的增高而逐渐增加，且相同浓度H2O2作用于各组RGCs 48h后测得的细胞生长抑制率均大于作用24h后的结果，差异有统计学意义（P＜0.01）。NP作用于同一浓度H2O2处理的RGCs后细胞凋亡抑制率与NP的浓度有关，在浓度为10-7mM时细胞凋亡抑制率最大，且相同浓度的NP作用于各组RGCs 48h后测得的细胞凋亡抑制率均大于作用24h后的结果，差异有统计学意义（P＜0.01）。RT-PCR及Western Blot法结果显示p53、bax、Caspase-9的表达量在H2O2组的RGCs中明显增多，在H2O2+NP组的RGCs中也增多，但增多量不及前者。AO/EB染色法结果显示空白对照组RGCs的细胞核呈现明亮的均匀绿色荧光，未见核固缩及核分裂。在H2O2组RGCs中，可见许多的致密的桔黄色荧光，出现明显的细胞核固缩，体积缩小，部分细胞核分裂。在H2O2+NP组细胞中，可见圆形或团块状的桔黄色荧光较H2O2组明显减少，细胞核固缩、体积缩小不明显。
结论 H2O2引起的OS对RGCs的增殖具有抑制作用，NP在一定程度上可以抵抗其抑制作用，且二者的作用水平与它们的浓度和持续时间有关。同时，H2O2引起的OS可诱导RGCs的凋亡，NP在一定程度上可以抵抗其诱导凋亡作用。 |
